? ? ?核酸（Nucleic Acids）是一種生物大分子，包括脫氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）。這兩類分子在生物體內(nèi)的主要作用是攜帶和傳遞遺傳信息。這兩類分子能夠用于疾病的預(yù)防、診斷和治療的，就是核酸藥物。
傳統(tǒng)的藥物以化學(xué)小分子為主，近二十年來以抗體和細(xì)胞藥物為代表的生物藥物也得到了廣泛的認(rèn)可，而區(qū)別于這兩類藥物的新一代核酸藥物即將成為藥物研發(fā)的主流。核酸藥物能夠以化學(xué)藥物或抗體藥物無法靶向（例如mRNA和miRNA）的分子作為作用靶點，有望對傳統(tǒng)藥物療效不佳的疾病產(chǎn)生突破性的進展，特別是難以治療的遺傳疾病、癌癥以及某些病毒感染（例如SARS-CoV-2）。諾華、默沙東、輝瑞制藥、藥明康德等多家藥企在該領(lǐng)域進行了重要的布局。
目前，全球已經(jīng)有12種核酸藥物獲批上市，預(yù)計今后每年也將有3～4種核酸藥物獲批。另外，預(yù)計到2025年，核酸藥物的市場規(guī)模將達(dá)到1百億美元 。作為主流核酸藥物的合成寡核苷酸，在經(jīng)過固相法或液相法的化學(xué)合成工藝后，通過反相層析（RPC）或離子交換層析（IEC）等方法進行分離和純化。但是，普通RPC工藝無法完全去除目標(biāo)產(chǎn)物中的相關(guān)雜質(zhì)，而且由于大量使用有機溶劑，需要進行廢液處理、配備防爆設(shè)備等，會產(chǎn)生對成本控制不利等因素。因此，相關(guān)人員正在研究使用可代替RPC的層析工藝 —— 疏水層析（HIC）。
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一、???疏水層析的優(yōu)勢（與RPC相比）
1.?????? 可以去除固相合成時從固相導(dǎo)出的樣品溶液中含有的氫氧化銨等低分子。
2.?????? 合成過程中，保護基二甲氧三苯甲基（DMT）與目標(biāo)物質(zhì)結(jié)合的DMT-on目標(biāo)物，與保護基脫落生成的DMT-off雜質(zhì)更容易被分離。
3.?????? 可以分離目標(biāo)產(chǎn)物的相關(guān)雜質(zhì)，即N-1雜質(zhì)、N+1雜質(zhì)、P=O雜質(zhì)、氰乙基化(CNEt)雜質(zhì)、無堿基雜質(zhì)等。
4.?????? 使用酸性洗脫液，可在柱內(nèi)完成目標(biāo)產(chǎn)物的脫三苯甲基化（DMT基團的脫保護）。
5.?????? 聚合物基質(zhì)的填料可使用堿性溶液（pH13以下），還可用NaOH溶液對層析柱進行CIP清洗。
由于洗脫液幾乎不使用有機溶劑，所以無需配備防爆設(shè)備，還可減少廢液處理的費用。
二、?使用HIC填料進行合成寡核苷酸的純化精制工藝示例
? ?三、使用HIC層析填料分離合成寡核苷酸的實例
從上述各種類型的HIC填料分離粗純的寡核苷酸的結(jié)果來看，DMT-off雜質(zhì)在所有的HIC填料上均無法被吸附，而是直接流穿。另外，從目標(biāo)產(chǎn)物的洗脫位置、與雜質(zhì)的分辨率（分離度）來看，TOYOPEARL Phenyl-650M和Butyl-650M更適用于寡核苷酸的純化。
