第131期 杜邦樹脂在多肽純化中的應(yīng)用

第131期 杜邦樹脂在多肽純化中的應(yīng)用

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目前市場(chǎng)上有超過(guò)60種美國(guó)食品藥品管理局（FDA）批準(zhǔn)的多肽藥物，該數(shù)量有望顯著增長(zhǎng)；目前約有140種多肽藥物正在進(jìn)行臨床試驗(yàn)，有超過(guò)500種治療性多肽處于臨床前開發(fā)階段。多肽可以通過(guò)化學(xué)合成（固相或液相）或通過(guò)基因重組法生產(chǎn)。在這兩種方法中，聚合物吸附樹脂（如AMBERCHROM CG 和 XT 系列）可用于捕獲和拋光步驟。????? ??????????AMBERCHROM 產(chǎn)品與硅膠色譜產(chǎn)品相比，具有明顯優(yōu)勢(shì)，因?yàn)樵摦a(chǎn)品可使用苛性堿（1M NaOH，在60℃）進(jìn)行在位清洗和消毒。這也意味著可以對(duì)生產(chǎn)設(shè)備進(jìn)行全面清潔和消毒，從而防止產(chǎn)品殘留或內(nèi)毒素和病毒污染。AMBERCHROM 產(chǎn)品在任何pH值的任何溶劑中均能保持穩(wěn)定，并具有出色的機(jī)械穩(wěn)定性。

為提取和純化生物制品，杜邦提供了針對(duì)各種應(yīng)用條件的吸附樹脂填料，其具有不同的粒徑分布、表面積、孔結(jié)構(gòu)、疏水性和穩(wěn)定性等：

? 酸/苛性堿pH范圍為1-14

? 有機(jī)溶劑

? 過(guò)氧乙酸、弱氧化劑

? 蒸汽滅菌

這些產(chǎn)品在堿液原位清洗過(guò)程中能保持穩(wěn)定，是二氧化硅層析產(chǎn)品的有效替代品。

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寡核苷酸

盡管寡核苷酸市場(chǎng)仍然相對(duì)較小，但快速增長(zhǎng)的分子診斷領(lǐng)域?qū)⑻岣邔?duì)合成寡核苷酸的需求。寡核苷酸是DNA或RNA聚合物，用于研究、基因治療、以及分子診斷和法醫(yī)學(xué)用途的DNA或RNA檢測(cè)探針。寡核苷酸可以通過(guò)化學(xué)或酶法合成。

? 在固相和液相合成中，每個(gè)核苷酸偶合到鏈上，直到形成所需序列。合成通常在18到40個(gè)循環(huán)之間，最常見的長(zhǎng)度大約為21個(gè)。在每個(gè)偶合循環(huán)中，少數(shù)寡核苷酸的鏈不會(huì)延伸，從而產(chǎn)生全長(zhǎng)產(chǎn)物（n）和缺失序列的混合物。

? 在酶法合成中，聚合酶可以復(fù)制小序列DNA，從而合成全部序列。該方法比化學(xué)合成法能得到更高純度的寡核苷酸。

寡核苷酸純化是指從所需的全長(zhǎng)序列中去除缺失序列的過(guò)程。反相層析法是最佳分離方法，因?yàn)樵摲椒ɡ昧撕?/span>5'-DMT基團(tuán)（DMT= 4,4'-二甲氧基三苯甲基）的全長(zhǎng)產(chǎn)物和缺失序列（無(wú)DMT基團(tuán)）之間疏水性的差異。全長(zhǎng)DMT寡核苷酸可以保留在樹脂柱上，而缺失序列則被洗掉。AMBERCHROM樹脂可用于脂質(zhì)體結(jié)合寡聚核苷酸和聚乙二醇適配子的純化。

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胰島素

胰島素主要用于治療I型糖尿病、孕婦糖尿病和糖尿病酮癥酸中毒。全球糖尿病患者超過(guò)4.5億，每年有170萬(wàn)人死于該疾病。治療中使用的胰島素最初是從豬或牛胰腺中提取的。隨后，通過(guò)化學(xué)和酶工藝轉(zhuǎn)化豬胰島素，或通過(guò)采用重組DNA技術(shù)的細(xì)菌合成，源自動(dòng)物的胰島素被人源胰島素所取代?，F(xiàn)在，人們通過(guò)某些氨基酸和作用動(dòng)力學(xué)的差異來(lái)區(qū)分人胰島素及其類似物（如：賴脯胰島素、門冬胰島素、甘精胰島素）。純?nèi)艘葝u素的好處，在于降低了抗體形成的風(fēng)險(xiǎn)。如今，胰島素主要使用重組DNA技術(shù)在酵母[釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）]或細(xì)菌（大腸桿菌）表達(dá)體系中生產(chǎn)。在收獲胰島素原，澄清發(fā)酵液，復(fù)性和酶切后，AMBERCHROM CG300M 和 XT30 或 XT20 可用于反相層析，將胰島素與各種雜質(zhì)（包括A21脫酰胺-胰島素等類似物）分離。

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胰高血糖素樣肽（ GLP-1）

胰高血糖素樣肽 （GLP-1） 可用于 II 型糖尿病的治療；在糖尿病患者體內(nèi)，碳水化合物由于胰島素抗性或缺乏胰島素而不被代謝，導(dǎo)致血液中葡萄糖水平高。胰高血糖素樣肽-1（ GLP-1）是30個(gè)氨基酸長(zhǎng)度的肽，能夠通過(guò)增強(qiáng)胰島素分泌，以葡萄糖依賴性方式降低血糖水平。胰高血糖素樣肽-1（GLP-1）被認(rèn)為是一種治療糖尿病的理想藥物。

AMBERLITE XAD1600N（ 一款二乙烯基苯聚合物吸附樹脂） 和 AMBERCHROM CG71M（一款具有增強(qiáng)親水性的不溶性脂肪族丙烯酸酯大孔吸附樹脂） 特別適合用于其純化步驟。

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降鈣素

降鈣素是一種由甲狀腺的濾泡旁細(xì)胞（通常稱為C細(xì)胞）在人體內(nèi)產(chǎn)生的激素。降鈣素參與調(diào)節(jié)血液中鈣和磷酸鹽的水平，抵消甲狀旁腺激素的作用。降鈣素是32個(gè)氨基酸的線性多肽。它通過(guò)抑制破骨細(xì)胞來(lái)減輕骨吸收。降鈣素目前的適應(yīng)癥是骨質(zhì)疏松癥和骨關(guān)節(jié)炎。降鈣素通過(guò)重組 DNA 技術(shù)或化學(xué)肽合成技術(shù)生產(chǎn)。AMBERCHROM XT30 適合用于其純化步驟。

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